微生物限度檢測儀內置泵檢查儀CYW-300B

微生物限度檢測儀(yi) 內(nei) 置泵檢查儀(yi) CYW-300B 

主要特征：

1.一體(ti) 化超小型設計，減小了對層流台操作空間的占用。

2. 濾膜預先滅菌,即拆即用,降低汙染源。

3.過濾杯采用唇形密封設計,不使用夾鉗和 O 型圈,無泄漏操作和均勻的微生物回收率

4.可同時抽濾多張濾膜。

5. 濾杯多種規格可選，有一次性PP濾杯，反複使用的玻璃濾杯和不鏽鋼濾杯，操作方便。

6.每個(ge) 濾頭均可單孔單控製，方便操作人員靈活使用。

7.無油真空泵設計，噪音低。

8.儀(yi) 器表麵經鏡麵處理，便於(yu) 清潔和消毒。

9.過濾頭可以火焰滅菌,方便連續實驗操作；

10. 配有內(nei) 置隔膜液泵，不需外接抽濾瓶，液體(ti) 直接通過隔膜液泵排除，減少了抽濾瓶使用上的繁瑣

11.已氧化的美觀的把手分布基座兩(liang) 端，加強整體(ti) 穩固；

12.穩固的低重心設計使其不會(hui) 因溶液滿載而發生翻倒。

適用範圍

疾控:江、河、湖、海、水樣

食品:純淨水、礦泉水、飲料

製藥:純化水、注射用水、原料藥、膠囊、生物製品、片劑、口服製劑

化工:多種需測試微生物水樣   化妝品:多種用水及產(chan) 品

微生物限度檢測儀(yi) 內(nei) 置泵檢查儀(yi) CYW-300B 

微生物限度檢測原理和應用範圍

微生物的檢測，無論在理論研究還是在生產(chan) 實踐中都具有重要的意義(yi) ，本文對生長量測定法、微生物計數法、生理指標法和商業(ye) 化快速微生物檢測簡要介紹了利用微生物重量，體(ti) 積，大小，生理代謝物等指標的二十餘(yu) 種常用的檢測方法，簡要介紹了這些方法的原理，應用範圍和優(you) 缺點。
　　一個(ge) 微生物細胞在合適的外界條件下，不斷的吸收營養(yang) 物質，並按自己的代謝方式進行新陳代謝。如果同化作用的速度超過了異化作用，則其原生質的總量（重量，體(ti) 積，大小）就不斷增加，於(yu) 是出現了個(ge) 體(ti) 的生長現象。如果這是一種平衡生長，即各細胞組分是按恰當的比例增長時，則達到程度後就會(hui) 發生繁殖，從(cong) 而引起個(ge) 體(ti) 數目的增加，這時，原有的個(ge) 體(ti) 已經發展成一個(ge) 群體(ti) 。隨著群體(ti) 中各個(ge) 個(ge) 體(ti) 的進一步生長，就引起了這一群體(ti) 的生長，這可從(cong) 其體(ti) 積、重量、密度或濃度作指標來衡量。微生物的生長不同於(yu) 其他生物的生長，微生物的個(ge) 體(ti) 生長在科研上有困難，通常情況下也沒有實際意義(yi) 。微生物是以量取勝的，因此，微生物的生長通常指群體(ti) 的擴增。微生物的生長繁殖是其在內(nei) 外各種環境因素相互作用下的綜合反映。因此生長繁殖情況就可作為(wei) 研究各種生理生化和遺傳(chuan) 等問題的重要指標，同時，微生物在生產(chan) 實踐上的各種應用或是對致病，黴腐微生物的防治都和他們(men) 的生長抑製緊密相關(guan) 。所以有必要介紹一下微生物生長情況的檢測方法。既然生長意味著原生質含量的增加，所以測定的方法也都直接或間接的以次為(wei) 根據，而測定繁殖則都要建立在計數這一基礎上。微生物生長的衡量，可以從(cong) 其重量，體(ti) 積，密度，濃度，做指標來進行衡量。
　　1. 微生物計量法
　　1.1 體(ti) 積測量法
　　又稱測菌絲(si) 濃度法，通過測定體(ti) 積培養(yang) 液中所含菌絲(si) 的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取量的待測培養(yang) 液（如10 mL）放在有刻度的離心管中，設定的離心時間（如5 min）和轉速（如5000 rpm），離心後，倒出上清夜，測出上清夜體(ti) 積為(wei) v，則菌絲(si) 濃度為(wei) （10-v）/10。菌絲(si) 濃度測定法是大規模工業(ye) 發酵生產(chan) 上微生物生長的一個(ge) 重要監測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由於(yu) 離心沉澱物中夾雜有一些固體(ti) 營養(yang) 物，結果會(hui) 有偏差。
　　稱幹重法
　　可用離心或過濾法測定。一般幹重為(wei) 濕重的10~20%。在離心法中，將體(ti) 積待測培養(yang) 液倒入離心管中，設定的離心時間和轉速，進行離心，並用清水離心洗滌1~5次，進行幹燥。幹燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘幹，或采用紅外線烘幹，也可在80 ℃或40 ℃下真空幹燥，幹燥後稱重。如用過濾法，絲(si) 狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾後用少量水洗滌，在40 ℃下進行真空幹燥。稱幹重發法較為(wei) 煩瑣，通常獲取的微生物產(chan) 品為(wei) 菌體(ti) 時，常采用這種方法，如活性幹酵母（Activity Dry Yeast, ADY）,一些以微生物菌體(ti) 為(wei) 活性物質的飼料和肥料。
　　1.3 比濁法
　　微生物的生長引起培養(yang) 物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養(yang) 物內(nei) 的菌體(ti) 生長作定時跟蹤時，可采用一種特製的有側(ce) 臂的三角燒瓶。將側(ce) 臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用於(yu) 發酵工業(ye) 菌體(ti) 生長監測。如使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計，在波長600 nm處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600，以此監控E.coli的生長及誘導時間。
　　1.4 菌絲(si) 長度測量法
　　對於(yu) 絲(si) 狀真菌和一些放線菌，可以在培養(yang) 基上測定時間內(nei) 菌絲(si) 生長的長度，或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管，到入合適的培養(yang) 基，臥放，在開口的一端接種微生物，一段時間後記錄其菌絲(si) 生長長度，借此衡量絲(si) 狀微生物的生長。
　　2. 微生物計數法
　　2.1 血球計數板法
　　血球計數板是一種有結構刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩(liang) 條脊，中央有一短橫溝和兩(liang) 個(ge) 平台，兩(liang) 脊的表比兩(liang) 平台的表麵高0.1 mm，每個(ge) 平台上刻有不同規格的格網，中央0.1 mm2麵積上刻有400個(ge) 小方格。通過油鏡觀察，統計大格內(nei) 微生物的數量，即可算出1 mL菌液中所含的菌體(ti) 數。這種方法簡便，直觀，快捷，但隻適宜於(yu) 單細胞狀態的微生物或絲(si) 狀微生物所產(chan) 生的孢子進行計數，並且所得結果是包括死細胞在內(nei) 的總菌數。
　　2.2 染色計數法
　　為(wei) 了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數，而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足，人們(men) 發明了染色計數法。借助不同的染料對菌體(ti) 進行適當的染色，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液，染色後在顯微鏡下觀察，活細胞為(wei) 無色，而死細胞為(wei) 藍色。
　　2.3 比例計數法
　　將已知顆粒（如黴菌孢子或紅細胞）濃度的液體(ti) 與(yu) 一待測細胞濃度的菌液按比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標準。
　　2.4 液體(ti) 稀釋法
　　對未知菌樣做連續十倍係列稀釋，根據估計數，從(cong) 適宜的三個(ge) 連續的10倍稀釋液中各取5 mL試樣，接種1 mL到3組共15隻裝培養(yang) 液的試管中，經培養(yang) 後記錄每個(ge) 稀釋度出現生長的試管數，然後查大或然數表MPN（Most Probable Number）得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於(yu) 食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物檢查。
　　2.5 平板菌落計數法
　　這是一種常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋，取體(ti) 積的稀釋菌液與(yu) 合適的固體(ti) 培養(yang) 基在凝固前均勻混合，或將菌液塗布於(yu) 已凝固的固體(ti) 培養(yang) 基平板上。保溫培養(yang) 後，用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9 cm的平板上出現50~500個(ge) 菌落為(wei) 宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅(jin) 可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養(yang) ，獲得了單克隆。
　　2.6 試劑紙
　　在平板計數法的基礎上，發展了小型商品化產(chan) 品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養(yang) 基，其中加入活性指示劑2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC，無色）待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養(yang) 。短期培養(yang) 後在濾紙上出現密度的玫瑰色微小菌落與(yu) 標準紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷準確，相比而言避免了平板計數法的人為(wei) 操作誤差。
　　2.7 膜過濾法
　　用特殊的濾膜過濾體(ti) 積的含菌樣品，經丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會(hui) 發橙色熒光，而死細胞則發綠色熒光。
　　3. 間接測定法
　　微生物的生長伴隨著一係列生理指標發生變化，例如酸堿度，發酵液中的含氮量，含糖量，產(chan) 氣量等，與(yu) 生長量相平行的生理指標很多，它們(men) 可作為(wei) 生長測定的相對值。因此可利用生理指標等間接參數來測定生物量。
　　3.1 測定含氮量
　　大多數細菌的含氮量為(wei) 幹重的12.5%，酵母為(wei) 7.5%，黴菌為(wei) 6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與(yu) CuO混合，在CO2氣流中加熱後產(chan) 生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。
　　3.2 測定含碳量
　　將少量（幹重0.2~2.0 mg）生物材料混入1 mL水或無機緩衝(chong) 液中，用2 mL 2%的K2Cr2O7溶液在100 ℃下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5 mL，在580 nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標準樣品做標準曲線。
　　還原糖測定法
　　還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用於(yu) 大規模工業(ye) 發酵生產(chan) 上微生物生長的常規監測。方法是，離心發酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鍾，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨(lin) 近終點時加入澱粉溶液，繼續加Na2S2O3至終點，查表讀出還原糖的含量。
　　3.4 氨基氮的測定
　　離心發酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02 mol/L的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02 mol/L的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養(yang) 液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。
　　3.5 其他生理物質的測定
　　P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙酰胞壁酸）等含量以及產(chan) 酸，產(chan) 氣，產(chan) CO2（用標記葡萄糖做基質），耗氧，黏度，產(chan) 熱等指標，都可用於(yu) 生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化，終產(chan) 氣量，微生物活性三方麵的測定反映微生物的生長。如在BMP-2的發酵生產(chan) 上，隨時監測溶氧量的變化和酸堿度的變化，判斷細菌的長勢。
　　4. 商業(ye) 化快速微生物檢測法
　　微生物的檢測，其發展方向是快速，準確，簡便，自動化，當前很多生物製品公司利用傳(chuan) 統微生物檢測原理，結合不同的檢測方法，設計了形式各異的微生物檢測儀(yi) 器設備，正逐步廣泛應用於(yu) 醫學微生物檢測和科學研究領域。例如：
　　4.1 試劑盒，培養(yang) 基等手段
　　抗幹擾培養(yang) 基和微生物數量快速檢測技術結合解決(jue) 了傳(chuan) 統微生物檢測手段不能解決(jue) 的難題，為(wei) 建立一套完整的抗幹擾微生物檢測係統奠定了堅實的基礎。如：抗幹擾微生物培養(yang) 基，新型生化鑒定管，微生物計數卡，環境質量檢測試劑盒等，可方便的用於(yu) 多項檢測。
　　4.2 借助新型儀(yi) 器
　　BACTOMETER全自動各類總菌數及快速細菌檢測係統可以數小時內(nei) 獲得監測結果，樣本顏色及光學特征都不影響讀數，對酵母和黴菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法（Impedance Technology）將待測樣本與(yu) 培養(yang) 基置於(yu) 反應試劑盒內(nei) ，底部有一對不鏽鋼電極，測定因微生物生長而產(chan) 生阻抗改變。如微生物生長時可將培養(yang) 基中的大分子營養(yang) 物經代謝轉變為(wei) 活躍小分子，電阻抗法可測試這種微弱變化，從(cong) 而比傳(chuan) 統平板法更快速監測微生物的存在及數量。測定項目包括總生菌數，酵母菌，大腸杆菌群，黴菌，乳酸菌，嗜熱菌，革蘭(lan) 氏陰性菌，金黃色葡萄球菌等。
　　微生物OD值是反映菌體(ti) 生長狀態的一個(ge) 指標，OD是Optical Density（光密度）的縮寫(xie) ，表示被檢測物吸收掉的光密度。通常400～700 nm 都是微生物測定的範圍，需要紫外分光光度計測大吸收波長。用得多的是：505 nm測菌絲(si) 菌體(ti) 、560 nm測酵母、600 nm測細菌。用測OD方法畫微生物生長曲線時，同一株菌的起始培養(yang) 濃度可以準備多管（根據檢測點的需要，如需檢測10個(ge) 點，就準備10管），然後每個(ge) 點取一管出來測OD值就行了。
　　一般測菌體(ti) 密度的OD的波長範圍是580 nm-660 nm，如枯草芽孢杆菌用600 nm，已經屬於(yu) 可見光區（200 nm～400 nm為(wei) 紫外光區，400 nm～800 nm為(wei) 可見光區）。空白如用水做，需要離心洗滌菌體(ti) ；空白如用不接種的培養(yang) 基做就不需要洗滌，但是不接種的培養(yang) 基要和接種的同時培養(yang) 以求條件一致，後注意一般OD值在控製在0.1~0.4好，在這個(ge) 區內(nei) 的值就可靠，如果OD大於(yu) 1.0，一般要稀釋後再測，因為(wei) OD太大，分光光度計的靈敏度就會(hui) 顯著降低。
　　一般都測吸光值，而且好是整個(ge) 實驗過程中，保持發酵液或菌體(ti) 的稀釋倍數一致，吸光值與(yu) 稀釋倍數不成正比，可保證整個(ge) 實驗點有可比性。且取值的時候要連續讀數，重複3次的數好。
　　另，用分光光度計測微生物的OD值為(wei) 什麽(me) 要把波長設為(wei) 600 nm
　　這個(ge) 波長其實隻是針對濁度，而分光光度計在600 nm處對濁度的反應比較靈敏。測吸收峰的實際意義(yi) 並不大，比如LB搖瓶培養(yang) 過夜的大腸杆菌，其實在400多納米處的吸收大，但那很可能是培養(yang) 液的吸收峰。